紫外光度计箱体盖子没盖紧会影响吸光度吗

问题描述：　　1.仪器是否工作正常（光源灯老化，电压不稳定，集成电路板、显示器有毛病，波长调节器有毛病等等） 　　2.标准溶液浓度是否准确 　　3.所用方法是否合理（你选用的标准方法是否符合你要测定的对象——被测定浓度范围，干扰情况，赋存状态等等） 　　4.所用试剂是否符合要求（纯度、干扰情况） 　　5.所用量器（天平、容量瓶、移液管等）是否存在系统误差 　　6.配置显色过程是否误操作（加入试剂顺序、加入量等） 　　7.显色时间、显色温度是否符合要求 　　8.样品槽是否洁净 　　9.测试吸光度范围是否在0.2--0.8之间 　　除此之外，数据处理也会带来误差。最好采用标准系列法，平行多次测定，计算机程序绘图，计算机计算每侧测定结果并求出平均值，按误差理论对数据进行处理，最后给出结果。

回答(1).　　紫外的吸收值A与浓度C之间关系是A=ECL,朗伯-比尔定律，在A=0.2--0.8之间时，吸收度与浓度c呈线性正比关系，A太大或太小两者关系直线会变成曲线，不成正比。 　　因为比色皿都是放一起的，每次用的都不是同样的，应该都挺干净的。 国标是测700nm波长下的吸光度，来算磷的浓度的。 　　先用相同溶剂测测两个比色杯的吸收度是否一样，扣除空白是用溶剂（例如，测样用的是水做溶剂，则用水做空白）。

回答(2).波长调了吗，至于测得吸光度，减去空白对照的话不会比实际值有太大出入

回答(3).250-300 nm 有中等强度的吸收峰（ε=200-2000），芳环的特征 吸收（具有精细解构的B带）。

回答(4).1.调整(1) 在接通电源前，应对仪器的安全性进行检查，电源线接线应牢固，接地线通地要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再接通电源。 (2) 将灵敏度旋钮调至“1”档(放大倍率最小)。调波长调节器至所需波长。 (3) 开启电源开关，指示灯亮，选择开关置于“T”，调节透光率[100?旋钮使数字显示[100.0]左右，预热20min . 根据溶液浓度大小，选择液层厚度合适的吸收池。 2.校正(!)打开吸收池暗室盖(光门自动关闭)，调节[0?]旋钮，使数字显示为“00.0”，盖上吸收池盖，将参比溶液置于光路，使光电管受光，调节透光率[100?] 旋钮，使数学显示为“100.0”。 (2)如果显示不到“100”，则可适当增加电流放大器灵敏度档数，但应尽可能使用低档数，这样仪器将有更高的稳定性。当改变灵敏度 后必须重新校正“0”和“100”。 (3)按(1)连续几次调整“00.0”和“100.0”后，如将选择开关置于“A”，调节吸光度调零旋钮，使数字显示为“.000”，即可进行下面吸光度A的测量;如将选择开关置于“C”，将标准溶液推入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示值为已知标准溶液浓度数值，即可进行下面浓度c的测量。 3.测定(1) 吸光度A的测量。将要测A的试样溶液推入光路，显示值即为待测样品的吸光度值A。 (2) 浓度c的测量。将要测c试样溶液推入光路，即可读出待测样品的浓度值c。 4.结束测量完毕，关闭电源，将各调节旋钮恢复至初始位置。取出吸收池洗净，晾干，存于专用盒内。 注意事项:(1) 使用前，使用者应该首先了解本仪器的结构和原理，以及各个旋钮之功能。 (2) 仪器接地要良好，否则显示数字不稳定。 (3) 如果大幅度改变测试波长时，在调整“00.0”和“100”后稍等片刻(因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间)，当稳定后，重新调整“00.0”和“100”即可工作。 (4) 仪器左侧下角有一只干燥剂筒，应保持其干燥，发现干燥剂变色应立即更新或烘干后再用。 (5) 当仪器停止工作时，关掉电源，电源开关需同时切断，并罩好仪器 希望以上对你有所帮助。

回答(5).刚好个人前段时间也思考了一下这个方面，所以回复下个人理解。这里说紫外吸光度： A=-lgT 其中A是吸光度，T是透过率，即入射光透过样品后的光强（透过光强）与透过前入射光强的比值。 入射光照射在待测样品上，会有反射、散射、透射以及吸收。因此，入射光强=反射光强+散射光强+透射光强+吸收光强。考虑一般的溶液样品，散射和反射可以忽略不计或者经参比样品扣除，因此入射光强可近似等于透射光强+吸收光强。 对于紫外吸收光谱而言，是由价电子受激跃迁而形成的。因此，当待测样品确定的时候（组成及物质的量确定），测量设备及仪器不发生变动的情况下（主要指吸收光程、测量时间等），吸收光强理论上是恒定的。 正常情况入射光能量足够，即入射光强比吸收光强要强，即在吸收光程内物质的紫外吸收达到了饱和。另一方面，对于特定的价电子跃迁而言，是否发生跃迁只和激发光的频率（即能量）有关，而与光的强弱无关。 因此，如果光源的强度，即入射光强发生变化（正常情况下仍比样品吸收光强要强），吸收光强理论上应该不变，使得透射光强会发生变化。 放在透过率计算上来看，就是相当于分子分母同时加上某一个不为零的数值。而由于分子分母不相等，所以势必造成透过率的变化，从而造成吸光度的变化。这里可以说，吸光度和光源强度有关系。 第二，光源在不同波长处的光的强弱是不同的，并且对于待测样品而言，对于不同波长处的光的吸收能力不同。将所有波长连一起，就是某一波段的吸收光谱。因此，光源强度发生变化会导致吸收光谱所有波长处的吸光度都发生变化。 但是，当光源强度发生变化时，往往不同波长处的变化幅度是不一样的。比如，以两个不同的光源为例，可能因为氘灯不一样、滤光片对不同波长的透过率不一样（也可以说没有完全相同的滤光片）等等，两个光源的光强在波长a处相差了30?而在波长b处就相差了50? 因此，光源强度发生变化不仅会导致各个波长处的吸光度发生变化，而且往往变化幅度不一致，即导致吸收光谱的形状发生变化。

回答(6).标准方法用的50mL比色管，现在手边只有25mL的，可以用25mL代替。所加待测液、各种试剂直接减半。标曲若用100mL的，那就是增加一倍。这样操作对结果没有影响。还有就是标曲用100mL的、待测液用25mL的，不是同规格比色管，对结果没有影响，因为紫外可见分光光度计的比色池用一套，厚度都是一样的，除非放在不一样的比色管用眼睛直接看才有影响，这样的话只能再倒在一样大的比色管里，总之只要浓度一样就可以了。 比色法 供试品本身在紫外-可见光区没有强吸收，或在紫外光区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，加入适当的显色剂，使反应产物的最大吸收移至可见光区。 用比色法测定时，由于显色时影响显色深浅的因素较多，应取供试品与对照品或标准品同时操作。除另有规定外，比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理。 当吸光度和浓度关系不呈良好线性时，应取数份梯度量对照品溶液，用溶剂补充至同一体积，显色后测定各份溶液的吸光度，然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量。 5 注意事项 5.1 试验中所用的量瓶和移液管均应经检定校正、洗净后使用。 5.2 使用的石英吸收池必须洁净。当吸收池中装入同一溶剂，在规定波长测定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3?下者可配对使用，否则必须加以校正。 5.3 取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装样品溶液以池体积的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂，为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用醮有空白溶剂的擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。使用后用溶剂及水冲洗干净，晾干防尘保存，吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸(3：1V/V)混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。 5.4 含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。例如甲醇、乙醇的截止使用波长为205nm。另外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置lcm石英吸收池中，以空气为空白(即空白光路中不置任何物质)测定其吸光度，溶剂和吸收池的吸光度应符合表3规定。 表3 以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸光度的规定 波长范围(nm) 220-240 241-250 251-300 300以上 吸光度 ≤ 0.40 ≤ 0.20 ≤ 0.10 ≤ 0.05 每次测定时应采用同一厂牌批号，混合均匀的同批溶剂。 5.5 称量应按药典规定要求。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时所取容积一般应不少于5ml。含量测定时供试品应称取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应称取2份......

回答(7).有两种可能接近4： 1、那人用的仪器灵敏度很高，但也不应该报这样的测定结果。 2、那人测定时把溶液稀释了，然后的数据是吸光度×稀释倍数。

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